一、流動(dòng)相選擇與優(yōu)化

 

　　流動(dòng)相的選擇直接影響分離效果和柱效。乙腈-水體系是常用的流動(dòng)相組合，其比例調(diào)整可實(shí)現(xiàn)大多數(shù)化合物的良好分離。對(duì)于極性較強(qiáng)的化合物，可考慮加入少量改性劑如甲酸或乙酸銨。流動(dòng)相的pH值應(yīng)控制在2-8之間，超出此范圍可能導(dǎo)致固定相降解。在使用前，流動(dòng)相必須經(jīng)過0.22μm濾膜過濾，并充分脫氣，避免氣泡影響檢測(cè)結(jié)果。

 

　　梯度洗脫程序需要根據(jù)樣品特性進(jìn)行優(yōu)化。初始比例應(yīng)確保目標(biāo)物充分保留，梯度斜率要適中，既要保證分離度，又要控制分析時(shí)間。建議采用分段梯度，在目標(biāo)物出峰區(qū)域設(shè)置較緩的梯度變化。

 

　　二、樣品前處理與進(jìn)樣

 

　　樣品前處理是保證柱效的重要環(huán)節(jié)。樣品必須經(jīng)過適當(dāng)凈化，去除顆粒物和強(qiáng)保留雜質(zhì)。溶解樣品的溶劑強(qiáng)度應(yīng)低于初始流動(dòng)相，避免出現(xiàn)溶劑效應(yīng)導(dǎo)致的峰形畸變。對(duì)于復(fù)雜基質(zhì)樣品，建議采用固相萃取或液液萃取等方法進(jìn)行預(yù)處理。

 

　　進(jìn)樣量需根據(jù)柱容量合理控制，一般不超過柱體積的1%。過大進(jìn)樣量會(huì)導(dǎo)致柱超載，影響分離效果。進(jìn)樣時(shí)要注意排除氣泡，確保進(jìn)樣體積準(zhǔn)確。自動(dòng)進(jìn)樣器需定期校準(zhǔn)，保證進(jìn)樣精度。

 

　　三、柱溫控制與維護(hù)

 

　　柱溫對(duì)分離選擇性和柱效有顯著影響。提高柱溫可降低流動(dòng)相粘度，改善傳質(zhì)，但可能降低選擇性。一般建議控制在30-40℃之間，具體溫度需通過實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。柱溫箱溫度波動(dòng)應(yīng)控制在±0.5℃以內(nèi)，確保分析重現(xiàn)性。

 

　　日常使用中要注意柱壓變化，壓力突然升高可能預(yù)示柱頭堵塞。建議在柱前安裝保護(hù)柱，延長(zhǎng)柱壽命。每次使用后需用適當(dāng)溶劑沖洗柱子，去除殘留物質(zhì)。長(zhǎng)期保存時(shí)，柱子應(yīng)充滿儲(chǔ)存溶劑，密封保存。